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省人民医院院检验中心开展核酸反向斑点杂交技术
加入时间:2014/8/20 10:48:37 点击量:

 省人民医院院检验中心开展核酸反向斑点杂交技术

 

    反向斑点杂交是利用生物素等标记的探针与特异性扩增PCR产物(DNA序列)杂交的新型技术。此项技术一次杂交就可以判断某一基因座位的大部分或全部等位基因,广泛用于基因分型、病原体检测、肿瘤研究等。为满足临床和患者需要,我院检验中心全自动核酸分子杂交仪将于20148月正式投入使用,现将开展项目介绍如下:

一、丙型肝炎病毒(HCV)基因分型

开展丙型肝炎病毒(HCV)基因分型,应用反向斑点杂交技术检测中国常见的1b2a3a3b6a五种亚型。不同的HCV亚型与病程发展和治疗应答相关,根据分型判定治疗的难易,制定对应的抗病毒治疗个体化方案。不同亚型感染引起临床过程与干扰素,利巴韦林的治疗反应与治疗用量不同。

1、临床意义

1HCV基因分布存在着地理、人群差异,因此当HCV在人群中爆发时,基因分型可作为追查其根源的有效工具。HCV 主要传播途径是直接与患者血液接触,通过对不同人群HCV分子学研究,使包括垂直传播与性传播在内的HCV其他传播途径受到广泛关注,并证实HCV可在结肠镜检查时于患者一患者问传播。

2HCV 感染的诊断通过对献血员检测血清中抗HCV抗体进行筛选,是目前阻止HCV传播的主要方法,但这种筛选的成败关键依赖于不同分离株问序列变异的程度。

3)感染了HCV 后,绝大多数(80)患者不能自行清除,而发展为慢性肝炎。研究基因分型在急性感染转变成慢性HCV中的作用,发现921b型急性感染患者会进展为慢性化,而其他类型仅35~50%。而这一现象已成为研究的焦点。

4HCV基因分型与肝脏疾病严重程度的关系目前尚无定论。有文献报道认为,在慢性HCV 患者中,lb 型的肝脏病变较其它类型更严重,患者比其它分型的患者年龄大,而且比其它分型早出现,认为HCV lbHCV肝脏病变严重,是因为它存在着较长的感染期,而非对肝脏具有更强的破坏。

5)对干扰素治疗的应答: 自从发现HCV以来,对预测干扰素长期应答相关因素的发现是一重大贡献。多项临床研究表明,对α-干扰素抗病毒治疗应答性有影响的常见因素包括年龄、病程、肝硬化、基因型和HCV RNA血清水平。多元分析表明lb型、高水平的HCV RNA是唯一对α-干扰素治疗无应答的独立性预测因子。普通干扰素治疗24周,2型的患者对于扰素的完全应答占60-70%,而1型患者仅占10-15%。

2、适用科室

适用于丙型肝炎病毒感染患者的各临床科室。

3、标本采集要求

    真空干燥采血管(生化管),采集患者静脉血3-4mlHCV-RNA荧光定量检测结果>1x103),2h内送检;48h4-8保存。

4HIS系统提交方式

     丙型肝炎病毒(HCV)基因分型。

二、人乳头瘤病毒(HPV)基因分型

开展人乳头瘤病毒(HPV)基因分型,定性并分型检测宫颈脱落细胞样本和生殖泌尿道分泌物中人乳头瘤病毒(HPV)常见的28个基因型别,包括:15 种高危型别:1618313335394551525658596873,82(MM4)3 种疑似高危型别:26536610 种低危型别:61140424344546181(cp8304)83(MM7)

1、临床意义

人乳头瘤病毒系空泡病毒A属,是球形DNA病毒,能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。表现为寻常、生殖器疣(尖锐湿疣)等症状。 随着性病中尖锐湿疣的发病率急速上升和宫颈癌、肛门癌等的增多,人乳头瘤病毒感染越来越引起人们的关注。目前已分离出130多种亚型,其中40多种与宫颈癌发病相关。因此,有针对性地进行HPV 的分型检测,对于HPV的临床诊断和宫颈癌的早期预防有重要的意义,可广泛用于临床诊断和女性体检。   

2、适用科室

 适用于人乳头瘤病毒感染患者的各临床科室。

3、标本采集要求

1适用标本类型:宫颈脱落细胞样本和生殖泌尿道分泌物。

2受检需知:月经正常妇女,在月经来潮后1018 天为最佳检查时间;检查前不要做阴道冲洗,不要在阴道内用药物;检查前24 小时内最好避免性生活。

3)标本采集:

宫颈样本:医护人员先用窥阴器或阴道张开器暴露宫颈,用宫颈刷置于宫颈口,顺时针旋转46 周以获取足量的上皮细胞,然后取出宫颈刷置于盛有2ml 生理盐水的无菌小试管中备检。若样本黏液过多或者含血量过多应该尽量重新取样。

女性尿道样本:首先使用无菌生理盐水棉球洗净尿道口,再用棉拭子插入尿道约2CM,然后捻动拭子,最后将拭子放入细胞保存液中,密闭送检。采集尿道样本时,受检者必须在采集前2 个小时禁止小便。

男性尿道样本:取尿道分泌物或使用细小的尿道拭子,插入男性尿道2-4CM,然后捻动尿道拭子取出分泌物,最后将尿道拭子放入细胞保存液中,密闭送检。

标本应立即用于测试,4保存不应超过1 个星期, -20保存不应超过3 个月。

4HIS系统提交方式

     人乳头瘤病毒基因分型。

三、送检地点及联系方式

1. 检测地点:门诊七楼检验中心分子生物实验室。

 2. 联系电话:0931-8281223


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